熒光定量PCR是在PCR擴增反應(yīng)體系中加入熒光基團，通過實時檢測擴增反應(yīng)中每個周期產(chǎn)物的熒光信號，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板的方法。以探針法熒光定量為例：在PCR擴增中，加入一對引物，并加入一個特異的熒光探針。探針兩端分別標(biāo)記有報告熒光基團和猝滅熒光基團。

　　熒光探針組的熒光信號在擴增開始時被任何一組熒光探針?biāo)钄啵瑹晒庑盘柋粺晒馓结?阻斷，從而使熒光監(jiān)測系統(tǒng)能夠接收到熒光信號，即每個擴增出的DNA鏈中，都有一個熒光分子形成，使熒光信號的積累與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

　　關(guān)于熒光定量PCR的應(yīng)用分析：

　　1、核酸定量分析：對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測,轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測，RNAi基因失活率的檢測等。

　　2、基因表達差異分析：比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時相的表達差異以及CDNA芯片或差顯結(jié)果的確證

　　3、SNP檢測：檢測單核苷酸多態(tài)性（SNP）對于研究個體對不同疾病的易感性或?qū)μ囟ㄋ幬锏牟煌磻?yīng)具有重要意義。由于SNP的結(jié)構(gòu)簡單，一旦知道SNP的結(jié)構(gòu)和信息量，采用這種技術(shù)進行高通量的SNP檢測將會變得簡單而準(zhǔn)確。

　　4、甲基化檢測：甲基化與許多人類疾病有關(guān)，尤其是癌癥。DNA在擴增前經(jīng)過處理，使未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則不受影響。用特異性引物和TaqMan探針區(qū)分甲基化和非甲基化DNA，不僅簡便而且靈敏。

　　5、產(chǎn)前診斷：人們不能治療由遺傳物質(zhì)變化引起的遺傳病。到目前為止，我們只能通過產(chǎn)前監(jiān)測來減少病兒的出生，從而預(yù)防各種遺傳病的發(fā)生，從母體外周血中分離胎兒DNA，用實時熒光定量PCR檢測Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)的方法。